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FCS – Espectroscopia de correlación de fluorescencia

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El método FCS FCS es un método de medición basado en fluorescencia.

Las moléculas fluorescentes que pasan a través de un láser fijo fuertemente enfocado se excitan por la emisión de fluorescencia. Después de pasar un agujero estelar confocal, los fotones emitidos se registran usando detectores muy sensibles.

La iluminación láser en un punto fijo de interés (estacionamiento de haz) excita partículas fluorescentes en el volumen de excitación. El movimiento de partículas dentro y fuera del volumen confocal causa fluctuaciones de intensidad.

 

  1. Parámetros cuantitativos derivados de la curva de autocorrelación

Las partículas en movimiento dan lugar a fluctuaciones de intensidad. Una autocorrelación de esto revela información sobre la escala molecular: la amplitud de la curva de correlación muestra el número de partícula. El tiempo en el punto de inflexión contiene información sobre la movilidad de partículas. Finalmente, la pendiente y la forma de la curva reflejan el tipo de difusión. La concentración de partículas, la masa de partículas, la viscosidad y la fracción unida se pueden derivar de estos parámetros.

Principio de adquisición y análisis de datos FCS

  1. La iluminación láser en un punto fijo de interés (estacionamiento de haz) excita partículas fluorescentes en el volumen de excitación. El movimiento de partículas dentro y fuera del volumen confocal causa fluctuaciones de intensidad.
  2. Registro de fluctuaciones de intensidad usando detectores en modo de conteo de fotones individuales.
  3. Cálculo de la función de correlación.
  4. Ajuste del modelo biofísico correspondiente a la curva de correlación. Obtener parámetros de interés:
  • Concentración de partículas
  • Coeficiente de difusión
  • Viscosidad
  • Masa molecular
  • Constante de enlace
  • Propiedades foto-físicas
Cálculo de la función de correlación.
Montaje del modelo biofísico correspondiente

Fuente: Leica Microsystems

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