Preparación de diatomeas para el análisis de agua

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Centrífugas Hettich- analítica medioambiental Preparación de diatomeas para el análisis de agua

En el contexto de la Directiva Marco del Agua (2000/60/ CE), las aguas deberán presentar una calidad definida hasta el año 2015. En ensayos biológicos de laboratorio se utilizan centrífugas para las aplicaciones más diversas. Un ejemplo de ello es la preparación de diatomeas.

Procedimiento: En primer lugar se procede a concentrar la muestra de agua mediante centrifugación.

El sobrenadante se elimina con cuidado por decantación y el pellet se mezcla con H2O2 al 30 % (vol. 30 ml), dejándose actuar durante varias horas (a ser posible durante toda la noche). De este modo se limpian los esqueletos silíceos de las diatomeas, por lo que son más fáciles de reconocer. El H2O2 a continuación se elimina por lavado, ya que es muy reactivo (cáustico, irritante y corrosivo). También aquí se centrifuga; los parámetros de centrifugación son los que se indican más arriba. Se realiza 4 veces un lavado con agua destilada. Atención: deberá utilizar recipientes de plástico cerrados y observar que el H2O2 no entre en contacto con las piezas metálicas de la centrífuga (a ser posible tampoco H2O2 en estado gaseoso)! ¡Deberá tener en cuenta las prescripciones de seguridad en la manipulación de H2O2! Después del cuarto proceso de lavado se decanta el sobrenadante excepto una pequeña gota residual. El pellet se agita con fuerza, depositando una sola gota de la suspensión de diatomeas así obtenida sobre un cubreobjetos. Esta gota es secada al aire y, a continuación, se cubre “del revés”.

Alternativa: Utilización de los accesorios citológicos de Hettich
Para poder procesar un volumen relativamente grande (máx. 8 ml), de forma que se obtenga un sedimento más denso, recomendamos la utilización de nuestros accesorios citológicos. Después del cuarto paso de lavado se conserva un volumen más grande en el tubo (p. ej. 10 ml).
A continuación se monta un adaptador citológico formado por un portaobjetos corriente rotulado, una placa de sujeción y una cámara citológica. Ahora se colocará la muestra concentrada en la cámara citológica, colocándose acto seguido el adaptador en el correspondiente soporte. Atención: siempre deberá cargar dos soportes opuestos.
Mediante la centrifugación que sigue se sedimentan las partículas en suspensión que se encuentran en la muestra encima del portaobjetos. Después de la centrifugación se decanta el sobrenadante y se desmonta el adaptador citológico. Ahora se encuentra un sedimento húmedo de 240 mm2 encima del portaobjetos, formado en su mayor parte por diatomeas. Éste ahora se secará al aire. El sedimento siempre se encuentra en la misma posición sobre el portaobjetos y presenta el mismo tamaño; por ello el resultado se hace más reproducible y es más fácil evaluarlo.

Para evitar artefactos de evaporación en forma de cristales o similares encima del portaobjetos, se recomienda secar los sedimentos celulares húmedos encima de una placa calefactora.

La mayoría de las centrífugas de Hettich pueden utilizarse para la aplicación descrita. Como recomendación hemos seleccionado un modelo de uso corriente con el que podrá realizar.