{"id":2419,"date":"2022-10-20T09:20:35","date_gmt":"2022-10-20T14:20:35","guid":{"rendered":"https:\/\/www.bairesac.com\/blog\/?p=2419"},"modified":"2022-11-07T09:38:53","modified_gmt":"2022-11-07T14:38:53","slug":"tincion-he-en-microscopia","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.bairesac.com\/blog\/archivo\/2419","title":{"rendered":"Tinci\u00f3n H&E en microscop\u00eda"},"content":{"rendered":"\n

C\u00f3mo hacer que las estructuras sean visibles en muestras de patolog\u00eda y por qu\u00e9 los microscopios juegan m\u00e1s de un papel<\/h4>\n\n\n
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\"\"<\/a><\/figure><\/div>\n\n\n

Si consideramos el papel de la microscop\u00eda en la rutina diaria de los pat\u00f3logos, a menudo pensamos en el diagn\u00f3stico. Si bien los microscopios juegan un papel crucial en esta etapa del flujo de trabajo del laboratorio de patolog\u00eda, se usan incluso antes: los t\u00e9cnicos de laboratorio o los pat\u00f3logos usan microscopios para verificar la tinci\u00f3n.<\/p>\n\n\n\n

Sin tinci\u00f3n, la vista a trav\u00e9s del microscopio revela algunos detalles estructurales b\u00e1sicos de las secciones de tejido o frotis, pero la mayor\u00eda de los detalles no son visibles. Esto es especialmente cierto con secciones muy delgadas que carecen de contraste y pueden parecer casi transl\u00facidas.<\/p>\n\n\n\n

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Figura 1: estas im\u00e1genes muestran una secci\u00f3n de tejido sin te\u00f1ir. Sin el uso de agentes de contraste como la hematoxilina y la eosina, es casi imposible identificar diferentes tipos de c\u00e9lulas o compartimentos de tejido, por lo que es dif\u00edcil extraer mucha informaci\u00f3n \u00fatil de las im\u00e1genes o incluso llegar a un diagn\u00f3stico.<\/figcaption><\/figure>\n\n\n\n

La tinci\u00f3n agrega contraste a medida que los diferentes componentes de la muestra adquieren un color y una intensidad de tinci\u00f3n diferentes, lo que hace visibles las estructuras dentro del tejido. La combinaci\u00f3n de tinci\u00f3n de elecci\u00f3n m\u00e1s com\u00fan es hematoxilina y eosina, tinci\u00f3n H&E para abreviar.<\/p>\n\n\n\n

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Figura 2: Los portaobjetos de vidrio se sumergen en diferentes soluciones para la tinci\u00f3n.<\/figcaption><\/figure>\n\n\n\n

El principio de la tinci\u00f3n H&E<\/h2>\n\n\n\n

La tinci\u00f3n con H&E se aplica despu\u00e9s de que el tejido se haya fijado, deshidratado, incrustado, seccionado y la secci\u00f3n se haya montado en un portaobjetos de vidrio. Antes de te\u00f1ir, el medio de inclusi\u00f3n, normalmente cera de parafina, debe eliminarse con disolventes, normalmente xileno. A continuaci\u00f3n, la secci\u00f3n se rehidrata pas\u00e1ndola por soluciones alcoh\u00f3licas graduadas de concentraci\u00f3n decreciente y terminando con agua.<\/p>\n\n\n\n

En el siguiente paso, la secci\u00f3n se sumerge en una soluci\u00f3n de hematoxilina para te\u00f1ir los n\u00facleos celulares. La intensidad de la mancha depende del tipo de tejido, el grosor de la secci\u00f3n, la duraci\u00f3n de la inmersi\u00f3n, por nombrar solo algunos factores. Las preferencias de los pat\u00f3logos que miran las l\u00e1minas tambi\u00e9n juegan un papel. Despu\u00e9s de un enjuague con agua, el azulado cambia la mancha rojiza de la hematoxilina a azul.<\/p>\n\n\n\n

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Figura 3: Esta imagen muestra n\u00facleos en el duodeno de cerca, con un aumento de 40x. Se ti\u00f1en de azul con hematoxilina. A pesar de la densa densidad de c\u00e9lulas en el tejido, la sutil tinci\u00f3n rosada de la eosina revela los pliegues y otras estructuras dentro del tejido.<\/figcaption><\/figure>\n\n\n\n

Comprobaci\u00f3n de la intensidad y la tinci\u00f3n de fondo<\/h2>\n\n\n\n

Una revisi\u00f3n r\u00e1pida con el microscopio les dir\u00e1 a los t\u00e9cnicos de laboratorio o pat\u00f3logos si la mancha es suficiente o demasiado fuerte. Si la tinci\u00f3n es insuficiente, repetir\u00e1n la inmersi\u00f3n en Hematoxilina. Si la mancha es demasiado intensa y la secci\u00f3n muestra tinci\u00f3n de fondo, diferenciar\u00e1n la secci\u00f3n para reducir la tinci\u00f3n con la ayuda de una soluci\u00f3n \u00e1cida. Despu\u00e9s de este paso, es necesario volver a te\u00f1ir y enjuagar con agua del grifo.<\/p>\n\n\n\n

El siguiente paso es la tinci\u00f3n de eosina. La eosina es una contratinci\u00f3n de la hematoxilina que permite la diferenciaci\u00f3n de gl\u00f3bulos rojos, col\u00e1geno y m\u00fasculo liso con diferentes tonos de rosa. Tambi\u00e9n puede ser necesaria la diferenciaci\u00f3n para eliminar el exceso de eosina, lo que se puede lograr con agua. Luego, los portaobjetos te\u00f1idos se deshidratan sumergi\u00e9ndolos en alcoholes graduados y luego en xileno. Una vez completada la tinci\u00f3n y la deshidrataci\u00f3n, las secciones se montan utilizando una gota de medio de montaje y un cubreobjetos.<\/p>\n\n\n\n

Cu\u00e1ndo comprobar la tinci\u00f3n<\/h2>\n\n\n\n

Los protocolos difieren en cuanto a si es necesario comprobar la tinci\u00f3n y la diferenciaci\u00f3n bajo el microscopio despu\u00e9s de la tinci\u00f3n con hematoxilina o despu\u00e9s de la tinci\u00f3n con eosina. La verificaci\u00f3n despu\u00e9s de la tinci\u00f3n con hematoxilina tiene la ventaja de poder ajustar inmediatamente, ya sea para volver a sumergir o repetir la diferenciaci\u00f3n. La verificaci\u00f3n despu\u00e9s de la tinci\u00f3n con eosina brinda a los t\u00e9cnicos de laboratorio o pat\u00f3logos una mejor idea del portaobjetos completamente te\u00f1ido.<\/p>\n\n\n\n

Si bien ambas son posibles, la verificaci\u00f3n r\u00e1pida juega un papel importante en el flujo de trabajo del laboratorio, ya que garantiza que los pat\u00f3logos que realizan el diagn\u00f3stico puedan ver los detalles que necesitan.<\/p>\n\n\n\n

Estructuras visibles<\/h2>\n\n\n\n

Los portaobjetos te\u00f1idos con H&E se observan utilizando iluminaci\u00f3n de campo claro. Mientras que la hematoxilina ti\u00f1e los n\u00facleos de un color p\u00farpura azulado, la eosina ti\u00f1e el citoplasma celular y el tejido conectivo de color rosado. Los pat\u00f3logos pueden diferenciar f\u00e1cilmente entre varios tipos de tejido, como m\u00fasculo o tejido conectivo, y percibir anomal\u00edas o irregularidades en las secciones debido a la tinci\u00f3n. Esto les ayuda a identificar cambios que podr\u00edan ser responsables de patolog\u00edas espec\u00edficas, como una infecci\u00f3n, una inflamaci\u00f3n cr\u00f3nica o un tumor maligno. La informaci\u00f3n visual permite a los pat\u00f3logos observar cambios estructurales dentro de los tejidos, lo que les permite determinar la naturaleza y el progreso de las enfermedades.<\/p>\n\n\n\n

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Figura 4: esta imagen general con un aumento de 5x muestra tres capas distintas de tejido en el duodeno: las regiones serosa, submucosa y mucosa. Cada regi\u00f3n reacciona de manera diferente con la hematoxilina y la eosina, por lo que los colorantes facilitan la distinci\u00f3n de las capas l\u00edmite. Para identificar la condici\u00f3n m\u00e9dica subyacente, es clave definir exactamente en qu\u00e9 parte del tejido y en qu\u00e9 tipo de c\u00e9lulas ocurre una patolog\u00eda.<\/figcaption><\/figure>\n\n\n\n
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Figura 5: Este aumento de 40x de un duodeno muestra el l\u00edmite entre las regiones submucosa y mucosa. La tinci\u00f3n H&E facilita la distinci\u00f3n entre los tipos de c\u00e9lulas. Un tipo de c\u00e9lula que atraviesa la barrera natural entre los dos compartimentos de tejido es un indicador com\u00fan de la progresi\u00f3n del c\u00e1ncer.<\/figcaption><\/figure>\n\n\n\n

Diferenciaci\u00f3n de colores<\/h2>\n\n\n\n

Los microscopios utilizados en el flujo de trabajo de tinci\u00f3n, as\u00ed como para el diagn\u00f3stico, deben proporcionar una buena diferenciaci\u00f3n de colores, ya que es crucial para diagn\u00f3sticos oportunos y precisos. La verificaci\u00f3n de la tinci\u00f3n generalmente se realiza con un microscopio independiente que ocupa poco espacio, ya que las mesas de laboratorio suelen ser espacios de trabajo abarrotados.<\/p>\n\n\n\n

Los microscopios utilizados para diagn\u00f3sticos deben estar equipados con una buena c\u00e1mara para que se capturen las sutiles variaciones de color en las im\u00e1genes requeridas para el informe y el archivo. Las funcionalidades de anotaci\u00f3n tambi\u00e9n son \u00fatiles para la creaci\u00f3n de informes. Si est\u00e1 interesado en obtener m\u00e1s informaci\u00f3n sobre los microscopios cl\u00ednicos adecuados, puede encontrar \u00fatil el art\u00edculo \u00abFactores a considerar al seleccionar microscopios cl\u00ednicos\u00bb.<\/p>\n\n\n\n

Autores<\/p>Peter Laskey , Dr.\u00a01<\/sup><\/a>
Claudia M\u00fcller<\/a><\/cite><\/blockquote>\n\n\n\n

Fuente: Leica Microsystems \/ Science Lab <\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

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