¿Cuál es el microscopio de investigación adecuado para mí? Este artículo le da una breve descripción de las principales características que debe tener en cuenta al elegir un microscopio de investigación óptica.

Un microscopio óptico es a menudo uno de los dispositivos centrales en un laboratorio de investigación y de las ciencias de la vida. Se puede utilizar para diversas aplicaciones que arrojan luz sobre muchas cuestiones científicas. Por lo tanto, la configuración y las características del microscopio son cruciales para su cobertura de aplicación, que van desde el campo brillante a través de microscopía de fluorescencia a células vivas de imágenes.

Este artículo proporciona una breve descripción de las características del microscopio relevante y envuelve las preguntas clave que debe tener en cuenta al seleccionar un microscopio de investigación.

¿Qué tipo de espécimen usas?

Una de las primeras cosas a considerar al seleccionar un microscopio de investigación es el tipo de espécimen que desea explorar. Para muestras fijas montadas en una diapositiva delgada de cristal, puede utilizar un microscopio vertical. Las células vivas requieren características especiales del microscopio porque se mantienen en recipientes de cultivo celular relativamente grandes llenos de medios de cultivo celular.

Sólo una configuración invertida, con el objetivo a continuación y el condensador por encima de la muestra, facilita el espacio libre esencial y la proximidad requerida del objetivo a la muestra. Al mismo tiempo, un microscopio invertido mantiene una buena accesibilidad a las células, p. Para añadir micromanipuladores.

Además, las células vivas requieren un ambiente adecuado para sobrevivir. La temperatura y la concentración de CO2 deben mantenerse en ciertos niveles. Una cámara climática con los controladores correspondientes es necesaria para realizar esta tarea.

¿En qué dimensiones piensas?

La muestra microscópica se extiende en tres dimensiones: longitud, anchura y altura. Mientras que algunos especímenes, como las secciones histológicas, se representan sólo en la dirección xy, existen otras aplicaciones que requieren adquisición también en la dimensión z. Para visualizar volúmenes 3D, p. De las células vivas, se recomienda un revólver motorizado objetivo que es capaz de guiar a su muestra paso a paso a través del enfoque. El software de imagen debe ser capaz de reconstruir las imágenes individuales para la visualización 3D.

Para las células vivas tienes que añadir el tiempo de la dimensión. En este caso, por ejemplo, la estabilidad del sistema es otra característica crítica. Debido al hecho de que los cambios de temperatura influyen en el sistema de imagen durante la adquisición, las medidas efectivas de contador son esenciales. Un ajuste automático del enfoque, como el control de enfoque adaptativo (AFC), contrarresta estas influencias térmicas y siempre encuentra el enfoque predefinido.

¿Qué método de contraste se adapta mejor a su muestra?

La mayoría de las células – especialmente células animales – investigadas con un microscopio no tienen suficiente contraste intrínseco para ver detalles finos. Los investigadores usan métodos de contraste para solucionar este problema. Mientras que el contraste de fase (PH) y el contraste de interferencia diferencial (DIC) manipulan la luz que pasa a través de la muestra para añadir contraste, también se puede teñir con tintes fluorescentes (inmunofluorescencia), respectivamente, utilizar proteínas fluorescentes.

De acuerdo con el método de contraste, el microscopio necesita equipo específico; p.ej. El contraste de fase necesita objetivos especiales mientras que DIC utiliza ciertos prismas que tienen que ser cambiados en el camino de la luz. Para la microscopía de fluorescencia se necesitan cubos de filtros especiales que permitan la correcta longitud de las ondas de luz para acceder y salir de la muestra.

¿Qué pasa con la fuente de luz?

La elección del método de contraste también determina la fuente de luz. La iluminación de la luz transmitida para la microscopía de campo claro convencional, el contraste de fase y la DIC puede realizarse con iluminación halógena o LED. La microscopia de fluorescencia se puede realizar con iluminación LED o con la ayuda de mercurio, xenón o lámparas de halogenuros metálicos de mercurio.

¿Desea documentar o publicar sus resultados?

Si desea tomar una imagen de su espécimen o hacer imágenes de células vivas, necesita una cámara de microscopio digital. Especialmente en el caso de imágenes fluorescentes de células vivas se recomienda una cámara sensible para minimizar la cantidad de luz de excitación que puede dañar las células. Además de las bien establecidas cámaras CCD y EMDDC, hoy en día sCMOS cámaras se puso en marcha debido a su alta eficiencia cuántica y velocidad de adquisición. Para obtener más información sobre las cámaras digitales de microscopio, lea el artículo Introducción a la tecnología de cámaras digitales.

Además, un gran campo de visión (FOV) ayuda a encontrar áreas interesantes con mayor rapidez ya imaginar más células al mismo tiempo. Los modernos microscopios de investigación cuentan con un FOV de 19 mm en el puerto de la cámara que coincide perfectamente con un chip de cámara de 19 mm sCMOS.

¿Quieres manipular tus células en el microscopio?

Durante los últimos años, la foto-manipulación de la muestra se hizo popular. Eso significa que los investigadores no solo observan las células vivas sino que las manipulan con la ayuda de la luz. La recuperación de la fluorescencia después de Photobleaching (FRAP) es un ejemplo que ayuda a desentrañar los procesos celulares dinámicos. Para este tipo de técnicas de manipulación a menudo se necesitan fuentes de luz adicionales que tienen que ser integrados en el trayecto de la luz del microscopio. Este enfoque no es trivial. El puerto Leica Infinity es una solución universal que combina fuentes de luz adicionales en el trayecto de la luz del microscopio sin alterar la calidad de la imagen para hacer, p. FRAP, foto-conmutación, ablación u optogenética. Con el adaptador adecuado a mano, los investigadores pueden incluso acoplar sus dispositivos hechos en casa.

¿Quién usará el microscopio?

La gama de usuarios de microscopio puede ser muy heterogénea. Especialmente en la universidad los usuarios pueden ser muy experimentados o principiantes absolutos. Por lo tanto, un sistema de microscopio fácil de usar que funciona con un software intuitivo, como el Leica Application Suite X (LAS X), ayuda a que la gente comience rápidamente y adquiera datos rápidamente. Por ejemplo, un diseño orientado al flujo de trabajo, asistentes de análisis de imágenes y una integración perfecta de periféricos en el sistema simplifican su trabajo